基因組DNA的提取 Genomic DNA Isolation

基因組DNA的提取通常用于構(gòu)建基因組文庫(kù)、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。利用基因組DNA較長(zhǎng)的特性,可以將其與細(xì)胞器或質(zhì)粒等小分子DNA分離。加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團(tuán)飄浮其中, 可用玻棒將其取出，而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部, 從而達(dá)到提取的目的。在提取過(guò)程中,染色體會(huì)發(fā)生機(jī)械斷裂,產(chǎn)生大小不同的片段,因此分離基因組DNA時(shí)應(yīng)盡量在溫和的條件下操作,如盡量減少酚/氯仿抽提、混勻過(guò)程要輕緩, 以保證得到較長(zhǎng)的DNA。一般來(lái)說(shuō),構(gòu)建基因組文庫(kù), 初始DNA長(zhǎng)度必須在100kb以上,否則酶切后兩邊都帶合適末端的有效片段很少。而進(jìn)行RFLP和PCR分析, DNA長(zhǎng)度可短至50kb, 在該長(zhǎng)度以上,可保證酶切后產(chǎn)生RFLP片段(20kb以下),并可保證包含PCR所擴(kuò)增的片段(一般2kb以下)。
不同生物（植物、動(dòng)物、微生物）的基因組DNA的提取方法有所不同; 不同種類(lèi)或同一種類(lèi)的不同組織因其細(xì)胞結(jié)構(gòu)及所含的成分不同，分離方法也有差異。在提取某種特殊組織的DNA時(shí)必須參照文獻(xiàn)和經(jīng)驗(yàn)建立相應(yīng)的提取方法, 以獲得可用的DNA大分子。尤其是組織中的多糖和酶類(lèi)物質(zhì)對(duì)隨后的酶切、PCR反應(yīng)等有較強(qiáng)的抑制作用,因此用富含這類(lèi)物質(zhì)的材料提取基因組DNA時(shí), 應(yīng)考慮除去多糖和酚類(lèi)物質(zhì)。